荧光显微镜(荧光显微镜照片的merge方法)

荧光显微镜
我们经常在文章中会看到荧光照片会以merge的方式进行展示，如下图。通过merge可以区分组织或细胞中同一位置的两种（或多种）荧光信号是否重叠。今天我们来讲讲如何merge荧光显微镜照片~
J Biol Chem. 2010 July 16; 285(29): 22576–22591

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基本原理
基本原理是将两张（或多张）等大的张片相同位置像素的颜色数据按照一个公式重新计算得出一个新的颜色。例如，荧光照片的红色和绿色重叠后为黄色。这种算法是基于RGB的“加色模式”（如下图），与Photoshop的图层融合模式“滤色”几乎相同。

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软件介绍
今天介绍一款科研中大家常用的软件：ImageJ。用它来merge照片比用Ps更简单、更直接（不用去管图层，图层模式）。ImageJ不需要安装，软件甚至在U盘中都能打开使用。为了方便大家使用，Windows和Mac版的软件包已上传到我们的论坛（地址：http://www.omicshare.com/forum/thread-2783-1-1.html），如需要Linux版的可到官网下载（https://imagej.nih.gov/ij/download.html）。

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软件操作方法
本文用到的素材（下图）来自三篇文献中的图，分别用于两种颜色、三种颜色、荧光图和明场图的merge演示。

点击软件包中的“ImageJ.exe”程序文件，就可以打开ImageJ的界面，嗯，很简单，似乎只有个菜单栏（如下图），但不要小看这个软件，在科研图片处理上可强悍得很，今天介绍的内容只是它的冰山一角。
然后，通过“FileOpen”逐一打开两张要merge的图，如这里打开“1-红.jpg”和“1-绿.jpg”两个图片文件。

接着，通过“ImageColorMerge Channels”命令窗口，选择红色和绿色通道对应的照片文件名，如下图。

点击OK按钮，就可以得到merge后的照片（如下图），注意，可勾选“Keep source images”，使之前打开的两张照片不会在合成新照片时被关掉。

同样的方法，在“Merge Channels”选3张照片也可以进行merge；荧光照片也可以和明场照片进行merge，此时明场照片对应的通道为C4（gray），如下图。
最后，通过“FileSave as”可对merge后的composite图片另存为所需的格式。

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小结
荧光照片的merge方法一般分为两种，一种是用与显微镜配套的软件进行merge，另一种是保存同一视野不同激发光对应的荧光照片，在结果展示时，用常规的图像处理软件（例如PS）进行merge。看荧光显微镜时若担心荧光会淬灭（特别是用荧光染料染色）可先迅速抓拍一堆照片，回去后选择拍得好的照片进行merge，用于结果的展示。此时，第二种方法可能更灵活，更从容。
最后，觉得本文还不错的话别忘了分享呐~

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